Calafou Biolab

Protocolo para cocinar varios medios de cultivo celular

Algunos medios para cultivo de microbios.

Agar nutritivo

CARACTERÍSTICAS Medio generalista. Sin inhibidores de desarrollo bacteriano. pH final = 7.3±0.2. Color ámbar claro a medio ligeramente opalescente.

COMPOSICIÓN (g/L) Pluripeptona: 5 (fuente de C y N) Extracto de carne: 3 NaCl: 8 Agar: 15

PREPARACIÓN Suspender en H2O. Mezclar y dejar reposar 5 min. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 min hasta su disolución. Distribuir y esterilizar 15 min a 121 ºC.

Base gelosa sangre

CARACTERÍSTICAS Medio de alto valor nutritivo, apto para organismos nutricionalmente exigentes. El NaCl mantiene el balance osmótico. pH final = 7.3±0.2. Color ámbar (con sangre, rojo cereza).

COMPOSICIÓN (g/L) Infusión de músculo de corazón: 375 Peptona: 10 NaCl: 5 Agar: 15 Opcional: sangre al 5-10%. Aporta un extra de nutrientes y permite detectar hemolisis.

EMB

CARACTERÍSTICAS Medio para aislamiento de bacilos Gram- de crecimiento rápido y pocas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae, que incluye Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Enterobacter, etc. pH = 7.2±0.2. Contiene inhibidores de desarrollo de Gram+.

Bacterias que usan lactosa y/o sacarosa: centro oscuro y periferia azulada.
No usan lactosa ni sacarosa: incoloras.
E. coli : verde metálico, centro negro azulado.
Citrobacter: aspecto metálico.
Klebsiella pneumoniae: mucosas, rosa púrpura, confluentes.
Proteus mirabilis: incoloras.
Candida: rosadas y puntiformes.
Enterococcus faecalis: pequeñas, puntiformes y transparentes.
Salmonella typhimurium: incoloras.
Shigella flexneri.: incoloras.

COMPOSICIÓN (g/L) Peptona: 375 Lactosa: 5 Sacarosa: 5 Fosfato dipotásico: 2 Agar: 13.5 Eosina: 0.4 * Azul de metileno: 0.065

PREPARACIÓN Suspender en H~2O. Mezclar y dejar reposar 5 min. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 min hasta su disolución. Esterilizar 15 min a 121 ºC. Enfriar a 45 ºC y distribuir agitando suavemente.

Mac Conckey

CARACTERÍSTICAS Bacilos Gram- de fácil desarrollo, aerobios o anaerobios facultativos. PH = 7.1±0.2. El pH disminuye alrededor de la colonia por la fermentación de la lactosa. Los no fermentadores de lactosa dan colonias incoloras. Contiene inhibidores del desarrollo de Gram+. Color rojo púrpura. E. coli: rojas con halo turbio. Klebsiella pneumoniae: rosadas mucosas. Salmonella typhimurium: incoloras, transparentes. Shigella flexneri: incoloras, transparentes. Proteus mirabilis: incoloras, transparentes. Enterococcus faecalis: diminutas, incoloras, opacas.

COMPOSICIÓN (g/L) Peptona: 17 Pluripeptona: 3 Lactosa: 10 Mezcla de sales biliares: 1.5 NaCl: 5 Agar: 13.5 Rojo neutro: 0.03 Cristal violeta: 0.001

PREPARACIÓN Suspender en H2O. Reposar 5 min y mezclar. Calentar suavemente y hervir 1 o 2 min hasta disolver. Esterilizar 15 min en autoclave a 121 ºC.

Estafilococo 110

CARACTERÍSTICAS Medio selectivo para Staphylococcus. pH = 7.0±0.2. El NaCl inhibe el desarrollo de las demás especies. Color ámbar claro, opalescente con precipitado.

COMPOSICIÓN (g/L) Extracto de levadura: 2.5 Tripteína: 10 Gelatina: 30 Lactosa: 2 D-Manitol: 10 NaCl: 75 HK2PO4: 5 Agar: 15

Sal y manitol

CARACTERÍSTICAS Medio selectivo para Vibrio y Staphylococcus. pH = 7.4±0.2. Color rojo. S. aureus: amarillas (fermenta manitol y baja el pH) S. epidermidis: rojas (no fermenta manitol)

COMPOSICIÓN (g/L) Extracto de carne: 1 Pluripeptona: 10 D-Manitol: 10 NaCl: 75 Agar: 15 Rojo fenol: 0.025

PREPARACIÓN Suspender en H2O. Reposar 5 min y mezclar. Hervir 1 o 2 min. Distribuir y esterilizar en autoclave 15 min a 121 ºC.

Salmonella Shigella

CARACTERÍSTICAS Medio selectivo para Salmonella y algunas especies de Shigella. pH = 7.0±0.2. Inhibidores de desarrollo de Gram+, coliformes y Proteus. Color rojo / naranja. Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis: transparente, centro negro (H2S) Shigella flexneri, S. sonnei: transparente Escherichia coli: rosa a rojo Klebsiella pneumoniae: rosadas cremosas y mucosas Enterococcus faecalis: incoloras, de muy escaso crecimiento Pseudomonas aeruginosa

COMPOSICIÓN (g/L) Pluripeptona: 5 Extracto de carne: 5 Lactosa: 10 Mezcla de sales biliares: 8.5 Citrato de sodio: 8.5 Na2S2O3: 8.5 Citrato férrico: 1 Agar: 13.5 Verde brillante: 0.00033 Rojo neutro: 0.025

PREPARACIÓN Suspender en H2O. Reposar 5 min y mezclar. Hervir 2 o 3 min. NO esterilizar en autoclave. Enfriar a 45-50 ºC y distribuir unos 20 ml / placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Fuentes

http://www.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation http://www.slideshare.net/jcustodio91/guia-iii http://www.slideshare.net/lilicarito1/identifcacion-de-salmonellas http://www.slideshare.net/miranda_col/eta-causadas-por-enterobacterias

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